RESUMO
O refluxo vésico-ureteral (RVU) é uma das condições urológicas comumente diagnosticada entre crianças. Altos graus dessa condição podem causar cicatrização renal, insuficiência renal e hipertensão arterial. A uretrocistografia miccional é o método mais comumente utilizado para o diagnóstico, no entanto, esse procedimento envolve sedação, cateterismo vesical e expõe a criança a uma quantidade significativa de radiação. A investigação metabolômica pode fornecer novos entendimentos sobre a doença e visa a descoberta de metabólitos específicos associados a ela. Assim, existe um potencial considerável para a implementação de perfil metabólico em análises clínicas. Dessa forma, buscou-se estabelecer uma alternativa não invasiva para identificar crianças com o RVU através da metabolômica. Para a investigação metabolômica alvo um método por eletroforese capilar acoplada ao espectrômetro de massas (CE-MS) com analisador to tipo ion trap foi desenvolvido e validado para a determinação de 27 aminoácidos em urina. Os parâmetros experimentais relacionados às configurações da interface CE-MS, eletrólito (BGE) e espectrômetro de de massas (MS) foram otimizados, proporcionando uma boa separação dos 27 aminoácidos, incluindo os isômeros L-leucina, L-isoleucina e L-alloisoleucina, em menos de 30 min. O líquido auxiliar (SHL) foi composto de 0,5% (v/v) ácido fórmico em 60% (v/v) água/metanol à uma vazão de 5 µL min-1. O BGE consistiu de 0,80 mol L-1 de ácido fórmico e 15% (v/v) de metanol. Um procedimento de stacking por pH foi implementado para aumentar a detectabilidade (uma solução de NH4OH a 12,5% (v/v) foi injetada a 0,5 psi/9 s antes das amostras). O método foi validado de acordo com os protocolos FDA e ICH, exibindo parâmetros aceitáveis. A quantificação bem sucedida dos aminoácidos em amostras de urina de um estudo piloto do RVU foi alcançada. A avaliação estatística dos resultados mostrou que alguns dos aminoácidos avaliados podem carregar informações que possibilitam discriminar as amostras de urina entre os grupos teste e controle. Para a análise metabolômica global urinária, métodos por RPLC-MS e HILIC-MS foram otimizados. Cinco colunas com diferentes propriedades foram investigadas para RPLC e quatro colunas para HILIC; adicionalmente, foram investigados a influência dos aditivos e pH da fase móvel. As condições ótimas foram determinadas avaliando o formato de pico, a relação sinal-ruído, o tempo de retenção, o número de molecular features detectados e sua distribuição durante o gradiente de eluição. A melhor condição obtida para RPLC utiliza a coluna CSH C18 e fase móvel composta por 0,1% (v/v) ácido fórmico em água (A) e 0,1% (v/v) ácido fórmico em acetonitrila (B). Para HILIC, o melhor desempenho foi obtido com a coluna zwitteriônica ZIC-HILIC e fase móvel composta por 10 mmol L-1 acetato de amônio pH 6,8 (B) e 95% (v/v) acetonitrila e 5% 200 mmol L-1 acetato de amônio pH 6,8 (A). As amostras de urina dos grupos controle e teste foram submetidas à análise metabolômica global por RPLC-MS usando o método otimizado e por CESI-MS. Os resultados indicaram que diversas rotas metabólicas podem ter sido alteradas pelo RVU. Alteração dos níveis de carnitinas e acilcarnitinas, aminoácidos e derivados, purinas e outros foi observada. Ainda, a presença de acilcarnitinas na urina podem indicar danos mitocondriais e a diminuição de triptofano e aumento do ácido quinurênico indicam uma alteração no metabolismo do triptofano
Vesicoureteral reflux (VUR) is one of the most commonly urologic conditions diagnosed among children. A high degree of this condition can cause kidney scarring, kidney failure and high blood pressure. Voiding cystourethrography is the standard method for diagnosis; however, this procedure involves sedation, bladder catheterization and exposes the child to a significant amount of radiation. Metabolomics has provided new insights about the disease and aims to discover specific metabolites associated with it. Thus, there is a considerable potential for the implementation of metabolic profile in clinical analyses. Thus, we attempted to establish a noninvasive alternative to identify children with VUR through metabolomics approach. For target metabolomics, a CE-MS method was developed and validated for the separation and quantitative analysis of 27 amino acids in urine. Experimental parameters related to the CE-MS interface (based on co-axial sheath liquid, SHL), background electrolyte (BGE) and mass spectrometer (MS) settings were optimized providing a good separation of 27 amino acids, including the isomers L-leucine, L-isoleucine and L-alloisoleucine, in less than 30 min. The SHL was composed of 0.50% (v/v) formic acid in 60% (v/v) methanol-water delivered at a flow rate of 5 µL min-1. The BGE consisted of 0.80 mol L-1 formic acid and 15% (v/v) methanol. A pH stacking procedure was implemented to enhance sensitivity (a 12.5% (v/v) NH4OH solution was injected at 0.5 psi/9 s prior to samples). The proposed method was thoroughly validated according to FDA and ICH protocols exhibiting acceptable parameters. A successful quantification of amino acids in urine samples from the VUR cohort was achieved. The statistical evaluation of the results showed that some of the amino acids may carry information for the discrimination of the urine samples between the test and control groups. For untargeted metabolomics analysis, methods by RPLC-MS and HILIC-MS were optimized. Five columns with different properties were investigated for RPLC and four columns for HILIC; additionally, the influence of additives and pH of the mobile phase were investigated. The optimum conditions were determined assessing the peak shape, signal-to-noise ratio, retention time, number of molecular features detected and their distribution during the elution gradient. The best condition obtained for RPLC uses CSH C18 column and mobile phase composed by 0.1% (v/v) formic acid in water (A) and 0.1% (v/v) formic acid in acetonitrile (B). For HILIC, the best performance was obtained with the zwitterionic ZIC-HILIC column and mobile phase composed by 10 mmol L-1 ammonium acetate pH 6.8 (B) and 95% (v/v) acetonitrile and 5% (v/v) 200 mmol L-1 ammonium acetate pH 6.8 (A). Urine samples from the control and test groups were submitted to global metabolomics analysis by RPLC-MS using the optimized method and by CESI-MS. The results indicated that several metabolic pathways may have been altered by VUR. Changes of carnitine and acylcarnitine levels, amino acids and derivatives, purines and others was observed. Furthermore, the presence of acylcarnitines in the urine may indicate mitochondrial damage and the decrease of tryptophan and increase of the kynurenic acid indicate a change in the metabolism of tryptophan
Assuntos
Urina/química , Refluxo Vesicoureteral/fisiopatologia , Metabolômica/instrumentação , Espectrometria de Massas/métodos , Eletroforese Capilar/métodosRESUMO
Avanços recentes no diagnóstico pré-natal têm permitido o aprimoramento da detecção e o manejo das anormalidades do trato urinário. A ultrassonografia pré-natal permite o reconhecimento de anormalidades urológicas que somente seriam identificadas tardiamente, após o aparecimento de sintomas ou complicações. A uretrocistografia miccional pode ser reservada para casos selecionados. Exames de medicina nuclear devem ser realizados em casos de hidronefrose moderada e grave. O estudo consistiu de uma revisão da literatura atual sobre a abordagem pós-natal da hidronefrose fetal. Os dados obtidos foram confrontados com a experiência da Unidade de Nefrologia Pediátrica do HC/UFMG na conduta e no seguimento de crianças com diagnóstico de uropatias detectadas na investigação de hidronefrose fetal.
Recent advances in prenatal diagnosis resulted in an improvement of detection and management of urinary tract abnormalities. Prenatal ultrasonography allows to identify urological abnormalities that otherwise would not be seen until later in life, when complications occur. The voiding cystourethrogram can be reserved for selected patients. Nuclear medicine exams should be performed in cases of moderate and severe hydronephrosis. A review of the current literature on postnatal approach of prenatal hydronephrosis was performed. Data obtained were compared with the records of the Pediatric Nephrology Unit HC/UFMG regarding management and follow-up of children with uropathies detected while investigating for fetal hydronephrosis.
Assuntos
Humanos , Recém-Nascido , Doenças Fetais , Hidronefrose/complicações , Hidronefrose , Ultrassonografia Pré-Natal , Sistema Urinário/anormalidades , Anormalidades Congênitas/diagnóstico , Diagnóstico por ImagemRESUMO
Introdução: Dentre as modalidades terapêuticaspara o refluxo vésico-ureteral (RVU), destaca-se o tratamentoendoscópico, principalmente por ser menosinvasivo. Objetivo: Avaliar os pacientes submetidos aotratamento com o copolímero poliacrilato-poliálcool(polyacrylate-polyalcohol copolymer - Vantris®). Métodos:Estudo clínico, com delineamento transversal e coletaretrospectiva dos dados. Foram analisados pacientessubmetidos ao tratamento endoscópico do RVU noHospital Infantil Joana de Gusmão no período de julhode 2010 a setembro de 2011. Resultados: 16 pacientes(24 ureteres) foram submetidos ao procedimento, sendo62,5% do gênero feminino e 37,5% do masculino.A idade média ao tratamento foi de 9 anos, 1 mês e 15dias. Dos ureteres, 4 (16,7%) apresentavam RVU grau II;13 (54,2%), grau III; 5 (20,8%), grau IV e 2 (8,3%), grauV. O sucesso do tratamento foi de 83,3% dos ureteres,sendo que o grau II apresentou resolução de 75%; ograu III, 84,6%; o grau IV, 100% e o grau V, 50%. Comocomplicações houve o surgimento de RVU contralateralem um paciente e a manutenção do RVU em duas crianças.Conclusões: o tratamento endoscópico do RVU semostrou promissor, embora a casuística ainda seja insuficientepara a validação estatística.
Background: Among the therapeutic options for vesicoureteralreflux (VUR), the endoscopic treatment standsout mainly for being less invasive. Objective: Thisstudy aims to evaluate patients who underwent treatmentwith polyacrylate-polyalcohol copolymer - (Vantris®). Methods: Clinical and cross-sectional study, withretrospective data collection. Patients who underwentendoscopic treatment for VUR at the Joana de GusmãoChildren?s Hospital between July 2010 and September2011 were analyzed in this study. Results: 16 patients(24 ureters) were submitted to the procedure, of which62.5% were females and 37.5% were males. The meanage at treatment was 9 years, 1 month, and 15 days.Four ureters (16.7%) had grade II VUR, 13 (54.2%) hadgrade III, 5 (20.8%) had grade IV, and 2 (8.3%) had gradeV. Therapeutic success was achieved in 83.3% of theureters, with resolution of 75% grade II, 84.6% gradeIII, 100% grade IV, and 50% grade V VUR cases. Complicationsincluded the emergence of contralateral VURin one patient and maintenance of VUR in two children.Conclusions: Endoscopic treatment of VUR has shownpromising results, though sample size is insufficient forstatistical validation.
RESUMO
O divertículo paraureteral de Hutch é uma alteração incomum do sistema urinário, geralmente associadocom retenção urinária aguda e infecções recorrentes, além de refluxo vesicoureteral. Descrevem os autores um caso de divertículo de Hutch, incidentalmente encontrado em homem etilista de 36 anos, durante a investigação de um episódio de pancreatite aguda. Os estudos de ultra-sonografia e tomografia computadorizada do abdome revelaram uma imagem paraureteral característica de divertículo de Hutch. O paciente não apresentou sintomas urinários, e os exames complementares descartaram retenção urinária e refluxo vesicoureteral. O divertículo foi classificado como congênito, e o paciente tem sido acompanhado no ambulatório da Unidade de Urologia, sem queixas relacionadas ao trato urinário. O propósito deste relato é ilustrar a ocorrência de divertículo de Hutch em adultos assintomáticos.
Hutch paraureteral diverticulum is an unusual abnormality of the urinary system, usually associated with acute urinary retention and recurrent infections, in addition to vesico-ureteral reflux. We describe a case of Hutch diverticulum, which was incidentally found in a 36 year-old alcoholic male during the investigation for an acute episode of pancreatitis. Abdominal ultrasonography and co mputed tomographic studies revealed a paraureteral image typical of the Hutch diverticulum. The patient did not present urinary symptoms, and the complementary evaluation ruled out both urinary retention and vesico-ureteral reflux. The diverticulum was classified as congenital, and the patient has been followed on the Urology clinics without any urinary complain. The aim of this report is to illustrate the occurrence of Hutch diverticulae in asymptomatic adults.
RESUMO
The advances of knowledge in the clinical course of vesicoureteral reflux and its consequences have allowed an improvement in the management of this common disease in children. In the last years, several facts have contributed for a better understanding of the etiology of reflux and of the associated renal damage. Among them, it is important to emphasize the neonatal diagnosis of the reflux in the investigation of fetal hydronephrosis, the precise detection of renal damage by renal scintigraphy and the advances of the genetic of primary vesicoureteral reflux. The aim of this study is review these aspects and the recent clinical trials...
Os avanços no conhecimento do curso clínico do refluxo vésico-ureteral e de suas consequências têm permitido um aperfeiçoamento na abordagem dessa doença freqüente na faixa etária pediátrica. Nos últimos anos, vários fatores têm contribuído para uma maior compreensão da genêse do refluxo e do dano renal associado. Entre esses destacam-se o diagnóstico neonatal do refluxo na investigação da hidronefrose fetal, a detecção mais precisa do dano renal através da cintilografia renal e os avanços no conhecimento da genética do refluxo vésico-ureteral primário. Esta revisão enfatiza esses avanços e os mais recentes estudos prospectivos controlados abordando a questão do tratamento do refluxo...